分光光度計用于確定溶液中某些化合物(例如蛋白質)的濃度。一般來說，一束光穿過裝滿樣品的比色皿。測量樣品吸收的光量。由于化合物吸收不同光譜范圍的光，因此必須為分析設置正確的波長。有多種方法可以通過分光光度法計算未知樣品的濃度，但使用參考標準可提供最佳準確度。此外，標準還指出分光光度計是否出現故障或其他分析問題。

　　通過直線方程計算

　　在分析開始時分析參考標準。標準是已知的濃度，用于校準設備和檢查準確性。所有樣品均應在標準的工作范圍內。如果不是，則需要稀釋樣品或增加標準濃度。

　　制作帶有標準濃度和吸光度讀數的散點圖或折線圖。濃度在 y 軸上，吸光度在 x 軸上。例如，標準為 1 ppm、2.5 ppm 和 5 ppm。給出的吸光度為 1 ppm= .25、2.5 ppm= .5 和 5 ppm= .75。

　　格式化趨勢線以在圖表上顯示方程式。該等式將顯示公式 y=mx+b。例如，使用步驟 2 中的標準，方程為 y= .1224x + 0.1531。大多數趨勢線在零處截取，但這取決于分析方法和 R 平方值。

　　分析未知樣品并記錄吸光度讀數。

　　使用方程 (y=mx+b) 確定樣品濃度。

　　理解直線方程

　　讓“Y”等于濃度。這就是將要解決的問題。

　　讓“X”等于樣品的吸光度。這是分光光度計測量的吸光度。

　　讓“”等于斜率，讓“b”等于 y 截距。兩者都給出，但是如果趨勢線被迫通過 0，則“b”將為 0。

　　求解濃度。使用步驟 3 中的示例，將“x”替換為給定的 0.563 吸光度。所以：

　　y= .1224(.563) + 0.1531

　　y(濃度)= .222011